腸骨リンパ節法とはIliac lymph node method for production of monoclonal antibody

• 腸骨リンパ節法とは
  ・腸骨リンパ節を使用します。
  ・抗原の注射は尾根部への１回のみです。←追加免疫は効率を下げます
  ・１匹の動物の免疫に必要な抗原量は50～100μｇです。
  ・免疫注射後２～３週間後に細胞融合を行います。
  ・抗体ができたかどうかは４週間でわかります。
  ・従来の脾臓を用いる方法の約10倍の効率です。
  ・陽性ウエルからのクローニングの成功率が高い。
  

  マウス腸骨リンパ節法は、重井医学研究所が開発した画期的な技術です。
  マウス腸骨リンパ節法は日本国特許(特許第4098796号)です。

   

  腸骨リンパ節法プロトコル

  ●Development, Growth & Differentiation
  An improved iliac lymph node method for production of monoclonal antibodies

  
  ●組織細胞化学会　学際企画
  モノクローナル抗体の作製　(講習会のテキストです。腸骨リンパ節法が詳しく書かれています)

  
  マウス腸骨リンパ節法
  ●Acta Histochemica et Cytochemica
  Lymphocytes from enlarged iliac lymph nodes as fusion partners for the production of monoclonal antibodies after a single tail base immunization attempt

  
  ラット腸骨リンパ節法
  ●Cell Structure and Function
  A novel method of preparing rat-monoclonal antibody-producing hybridomas by using rat medial iliac lymph node cells

  
  

  作製のステップ
  １：動物への抗原免疫注射
  ２：細胞融合、腸骨リンパ節細胞の凍結保存、血清の保存
  ３：スクリーニング
  ４：ハイブリドーマのクローニング

  作製スケジュール
  ・抗原：組み換え蛋白質、合成ペプチド、精製蛋白質、糖鎖などを用意する。
  ・必要最低抗原量は１～２ mgです。
  ・免疫に必要な抗原量：マウス１匹あたり50μｇ、ラット１匹あたり50～100μｇ
  ・免疫に必要な抗原濃度：500μｇ/ml以上

  抗体の使用目的
  目的に応じたスクリーニングが必要です。
  ・ウエスタンブロットによる抗原の同定
  ・免疫染色による細胞・組織の染色
  ・ELISA法による生理活性物質の測定
  ・アフィニティカラムを用いた抗原の精製
  

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  ！　注　意　！
  マウス腸骨リンパ節法は、日本国特許です(特許第4098796号)。
  特許権者の実施許可無くマウス腸骨リンパ節法を使用すると、特許法に触れます。
  大学・研究所等での基礎研究も例外ではありません。
  なお、ラットリンパ節法は特許ではありません。ご自由にお使いください。